Sådan bruger du Culture Shock klar-til-brug flydende kultur (LC)
Dette sterile, klar-til-brug flydende dyrkningsmedie gør det super nemt at udvide dit mycelium.
Ingen trykkoger påkrævet!
Før du går i gang
Tag et brusebad
Jeg kan bogstaveligt talt lugte dig herfra, dine venner er for søde til at sige noget. Det var en joke. Men din krop er en stor kilde til ulækker forurening, så rens den og tag noget rent tøj på.
Luk vinduerne
Luftbårne forurenende stoffer er et problem, når man udfører inokulationer af enhver art. Vi ønsker ikke, at et stykke lorteskimmel kommer med på spidsen af din sprøjte. Luk vinduer og døre, mens du arbejder.
Rengør overflader
Brug 70 % isopropylalkohol eller overfladeblegemiddelspray, og tør din arbejdsflade af.
Spray på et stykke køkkenrulle i stedet for at sprøjte direkte på overfladen.
Aseptisk teknik
NOGLE AF DE FØLGENDE TEKNIKKER KRÆVER EN STILLEDÅSE ELLER ET FLOW UNIT.
Kvalitetstestning LC / sporeløsning
Grundlæggende den samme proces som ovenfor. Men denne gang overvåger vi resultatet for kontaminering i stedet for blot at dyrke mycelium.
Rengør porten
Tør den sorte injektionsport af med din vådserviet.
Lad porten tørre, før du inokulerer.
Inokulere
Skub langsomt din sporesprøjte (med en frisk steril kanyle) ind i midten af porten nok til at passere porten, men ikke så langt at den rører agaroverfladen.
Injektér forsigtigt et par dråber på overfladen af agaren og fjern sprøjten.
Mærk & inkuber
Mærk din potte med datoen og noter, hvilken art/fænotype du har i den.
Find et dejligt varmt sted som dit tørreskab til at inkubere dine sporer.
Tjek resultater
Efter cirka en uge burde du begynde at se mycelium vokse inde i din potte! Hvis tingene ser mærkelige ud, kan du se vores hurtige guide til almindelig kontaminering nedenfor.
*Åbn ikke potten i øvrigt, jeg åbnede den kun på billedet, så du kan se, hvad der foregår!
Udvidelse af en flydende kultur
Superenkelt, ingen SAB eller Flow Unit påkrævet.
Du skal bruge:
- En sprøjte til flydende kultur
Rengør porten
Tør den sorte injektionsport af med din vådserviet.
Lad porten tørre, før du inokulerer.
Kvalitetstest af sprøjten
Ville det ikke være skuffende, hvis du overførte en sprøjte fuld af dårlige ting til din krukke med sterilt medie. Du kan bruge en af vores agar-kopper til at tjekke din LC, før du spilder en masse tid og kræfter.
Tro mig, det er det værd.
Inoculer krukken med flydende kultur
Brug en frisk nål, og injicér forsigtigt en hel sprøjte flydende kultur i dit glas.
Gør dette langsomt, da det ekstra lufttryk kan skubbe porten af.
Du kan bruge mindre, men det vil tage længere tid at kolonisere.
Mærk & inkubér
Find et dejligt varmt sted som dit varmeskab til at inkubere din flydende kultur.
Kontroller potten dagligt og hvirvl væsken for at fremskynde koloniseringen, eller brug en magnetomrører.
Visuel kontrol
Efter en uge eller to bør du have synligt mycelium suspenderet i dit flydende dyrkningsmedie! Hold det op mod lyset for at give en visuel kontrol for åbenlys kontaminering.
Bakterieforurening! 🦠
Din flydende kultur bør ikke være uklar, da dette indikerer bakteriel kontaminering. Bemærk, at det venstre glas er klar væske med suspenderet mycelium, det højre er meget bakterielt.
Kvalitetstest
Inden du bruger din flydende kultur, skal du køre den igennem den kvalitetstest-arbejdsgang, vi skitserede ovenfor. Dette vil spare dig for en masse spildtid og energi!
Godt klaret
Du har låst op for en ny mykologiteknik. Du er nu klar til at udarbejde flydende kultur og lave sprøjter til dine venner og familie.
Jeg er stolt af dig.
Spore > Agarplader > Flydende kultur
Vi dækker dette i vores instruktionsmanual til agar-potter
Agarplader > Flydende kultur
Til denne proces skal du bruge følgende:
- Still Air Box eller Flow Unit
- Nitrilhandsker
- Steril skalpel
- Agarplade med mycelium
- Isospray + køkkenrulle
Brug handsker
Tag dine handsker på, og spray dem grundigt med iso, og lad dem tørre, før du rører ved de ting, du arbejder med.
Hvis du forlader dit SAB eller rører ved noget ikke-sterilt, skal du gentage dette trin.
Sprøjt forsyningerne af
Saml alle de ting, du skal bruge for at holde rent inde i din SAB foran din renluftsflowenhed. Giv alt en god spray med iso (ideelt set mæt et stykke køkkenrulle og tør af).
Lad det tørre helt, før det tages i brug.
Gør det færdigt, du er begyndt på
Dette er ikke en stop-start proces. Prøv at være omhyggelig med at være ren og arbejde fra start til slut. Dette vil give dig en meget højere succesrate.
Løsn låget
Løsn låget på din flydende kulturkrukke uden at fjerne det. Processen med at håndtere et stykke agar på spidsen af en skalpel og forsøge at åbne en stram krukke er ikke et forsøg værd.
Fjern parafilm fra agar
Ligesom din krukke, vil vi gøre denne agar let tilgængelig, så du ikke gør dit liv mere besværligt end nødvendigt.
Arbejdsgang
Placer genstande i din still air box eller i flow på en måde, der minimerer kontaminering. Du skal tænke over, hvordan dine hænder/arme unødigt svæver over ting, du ønsker skal forblive sterile.
Banebrydende
Når du skærer i din agar, bør du skære overskuelige sektioner fra den førende kant af myceliet. Disse førende spidser af mycelievækst kaldes Spitzenkörper (se nedenfor for information om dette).
Hold det lille
Dine agarstykker bør ikke være for store, ellers vil du ikke kunne bruge en magnetomrører (agaren vil hele tiden skubbe magneten ud af midten). Nogle få 1 cm store stykker ville være gode.
Skær først
I stedet for at lave mange sektioner agar én ad gangen. Klip de stykker, du vil overføre, så de er klar til blot at blive løftet af fadet og smidt ned i din krukke.
Muslingeskalbeskyttelse
Når du åbner låg, skal du bruge låget som et skjold mod potentiel kontaminering ved at åbne det mod ren luft og væk fra kontaminering (såsom dit ansigt).
Skiftetid
Løft petriskålens låg med den ene hånd, og brug den skarpe spids af din skalpel til at løfte myceliumkilen ud, og luk låget. Løft forsigtigt låget på din LC-krukke og læg dine kiler i en efter en. (Jeg plejer at lægge 2 eller 3 i).
Mærk og inkuber glas
Find et dejligt varmt sted som dit varmeskab til at inkubere din flydende kultur.
Kontroller potten dagligt og hvirvl væsken for at fremskynde koloniseringen, eller brug en magnetomrører.
Forsegl din tallerken
Genforsegl din petriskål med parafilm, så den kan genbruges senere.
Flamér din skalpel mellem pladerne
Hvis du arbejder på en ny agarplade, skal du huske at flammesterilisere din skalpelklinge mellem overførsler for at forhindre krydskontaminering.
Spitzenkörper
Spitzenkörper (tysk [ingen overraskelse] – for 'spids krop', SPK) er en struktur, der findes i svampehyfer og er det organiserende center for hyfevækst og morfogenese. Den består af mange små vesikler og er til stede i voksende hyfespidsere, under spirespiring, og hvor forgrening finder sted. Dens position i hyfespidsen korrelerer med retningen af hyfevækst. - Fra Wikipedia
Har du brug for support undervejs?
Tingene ser ikke altid ud, som man forventer, så hvis du vil have råd eller en second opinion om noget som helst, kan du få hjælp fra vores team og fællesskabet!
